以下是本生對(duì)影響ELISA試劑盒測(cè)定成果的常見原因及對(duì)應(yīng)解決辦法的總結(jié)：

　　一、試劑相關(guān)因素?

　　試劑質(zhì)量問(wèn)題?

　　原因?：使用過(guò)期試劑、不同批號(hào)混用或非正規(guī)廠家產(chǎn)品可能導(dǎo)致靈敏度下降或假陽(yáng)性/陰性。

　　解決?：選擇有“三證"的品牌試劑，避免混用批號(hào)，使用前室溫平衡20-30分鐘。

　　試劑保存不當(dāng)?

　　原因?：未按說(shuō)明書要求儲(chǔ)存(如2-8℃或-20℃)，導(dǎo)致活性喪失。

　　解決?：分裝保存高頻使用試劑，避免反復(fù)凍融;OPD等底物需現(xiàn)配現(xiàn)用。

　　二、樣本相關(guān)因素?

　　內(nèi)源性干擾?

　　類風(fēng)濕因子(RF)?：與IgG非特異結(jié)合導(dǎo)致假陽(yáng)性。可通過(guò)使用F(ab)?片段抗體處理樣本。

　　補(bǔ)體干擾?：激活后交聯(lián)抗體或封閉表位。建議用EDTA抗凝血或56℃加熱滅活補(bǔ)體。

　　外源性干擾?

　　溶血/脂血?：血紅蛋白或脂類干擾顯色。需離心后取澄清上清液檢測(cè)。

　　細(xì)菌污染?：內(nèi)源性酶(如HRP)導(dǎo)致假陽(yáng)性。嚴(yán)格無(wú)菌操作并避免樣本長(zhǎng)期存放。

　　三、操作相關(guān)因素?

　　加樣誤差?

　　原因?：加樣量不準(zhǔn)、氣泡產(chǎn)生或孔間交叉污染。

　　解決?：使用校準(zhǔn)移液器，加樣至孔底1/3處，避免觸碰孔壁。

　　溫育問(wèn)題?

　　原因?：時(shí)間/溫度不達(dá)標(biāo)或蒸發(fā)導(dǎo)致濃度偏差。

　　解決?：貼封片防蒸發(fā)，嚴(yán)格按說(shuō)明書設(shè)置溫育參數(shù)，水浴減少邊緣效應(yīng)。

　　洗滌不凈?

　　原因?：洗液殘留或洗板針堵塞。

　　解決?：手工洗板時(shí)注滿每孔，自動(dòng)洗板機(jī)定期維護(hù)。

　　四、設(shè)備與環(huán)境因素?

　　儀器校準(zhǔn)?

　　原因?：酶標(biāo)儀光源不穩(wěn)定或移液器誤差。

　　解決?：定期校準(zhǔn)設(shè)備，預(yù)熱酶標(biāo)儀15分鐘以上。

　　溫濕度控制?

　　原因?：高溫或光照加速底物降解。

　　解決?：顯色階段避光，實(shí)驗(yàn)室保持恒溫(20-25℃)。

　　五、其他注意事項(xiàng)?

　　方法學(xué)選擇?：競(jìng)爭(zhēng)抑制法重復(fù)性較差，優(yōu)先選用雙抗體夾心法等穩(wěn)定性高的方法。

　　質(zhì)控品使用?：每批次實(shí)驗(yàn)加入陰/陽(yáng)性對(duì)照，監(jiān)控系統(tǒng)誤差。

　　通過(guò)綜合控制上述因素，可顯著提高ELISA檢測(cè)的準(zhǔn)確性和可靠性。

　　注：以上資料僅供參考，具體請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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