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液氮凍存管操作指南:從分裝到存儲(chǔ)的完整流程解析

更新時(shí)間:2025-05-29    點(diǎn)擊次數(shù):294

  液氮凍存管操作指南:從分裝到存儲(chǔ)的完整流程解析

  天津本生液氮凍存管操作全流程指南

  一、?前期準(zhǔn)備?

  凍存管選擇?

  優(yōu)先選用聚丙烯(PP)材質(zhì)內(nèi)旋蓋凍存管,耐-196℃低溫且密封性強(qiáng)。

  容量建議1.5-2.0mL,分裝時(shí)保留10%-20%空間防凍脹破裂。

  樣本處理?

  細(xì)胞樣本需調(diào)整至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期(活力>95%),與凍存液(如10% DMSO+90% FBS)混合均勻。

  菌種樣本需與保護(hù)劑(如10%甘油)配制成懸液,濃度控制在10?-101?個(gè)/mL。




  二、?分裝與標(biāo)記?

  無菌分裝?

  在超凈臺(tái)中操作,避免污染;分裝后立即擰緊管蓋,確保密封性。

  信息標(biāo)記?

  使用激光雕刻或耐低溫標(biāo)簽,標(biāo)注樣本名稱、日期、操作者等關(guān)鍵信息。

  三、?程序降溫?

  梯度冷凍?(推薦)

  4℃平衡30分鐘 → -20℃保持2小時(shí) → -80℃預(yù)冷4小時(shí) → 轉(zhuǎn)移至液氮?dú)庀鄥^(qū)(-150℃)過渡1小時(shí)。

  快速冷凍?

  使用程序降溫盒(如Mr. Frosty),以-1℃/min速率直接降至-80℃。

  四、?液氮存儲(chǔ)規(guī)范?

  存儲(chǔ)模式?

  氣相存儲(chǔ)?(-150℃~-190℃):適合頻繁存取,溫度波動(dòng)小。

  液相存儲(chǔ)?(-196℃):長(zhǎng)期保存選擇,需嚴(yán)格密封防液氮滲入。

  安全措施?

  凍存管需裝入凍存盒或紗布袋,避免直接接觸液氮。

  液氮罐需定期檢查液位(保持≥1/3容量)。

  五、?復(fù)蘇操作?

  快速解凍?

  從液氮中取出后立即置入37℃水浴,輕柔搖動(dòng)1-2分鐘至融化。

  離心去保護(hù)劑?

  將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管,加入培養(yǎng)基離心后棄上清,重懸接種。

  六、?風(fēng)險(xiǎn)控制?

  防爆管?:選用高質(zhì)量?jī)?nèi)旋蓋凍存管,避免直接浸入液相液氮。

  防護(hù)裝備?:操作時(shí)穿戴低溫手套、護(hù)目鏡,防止凍傷或爆管傷害。

  (注:長(zhǎng)期存儲(chǔ)樣本建議每5年檢測(cè)活性。)

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